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多功能酶标仪选择的要素
发布时间:2021-06-11浏览次数:

1. 过滤器和光栅

多功能酶板分析仪的分类方法有很多,但最简单的是以其过滤方法为分界线。

一般来说,酶板仪可分为过滤式和光栅式两大类。有些模型,如Synergy4和Envision,在一台机器上同时拥有滤波器和光栅。但滤光片和光栅不能同时完成同样的检测,或想用光栅当光栅,用滤光片当滤光片;也有一些实验,你必须使用其中一个模块,而另一个模块做不到。所以这些设备本质上只是过滤器和光栅的组合,而不是融合产生新的技术突破。

一般来说,由于滤光片技术已经发展了很长一段时间,它可以满足大多数实验用光路系统如双色镜(实际上是另一种滤光片模式的反光滤光片)的需要。目前,传统多功能酶板分析仪检测灵敏度最高的是过滤型。例如,Tecan Infinite F500的荧光检测灵敏度可以达到0.04 fmol/ well(荧光素,384 Wells /80ul)。

然而,由于滤光片的波长和数量的限制,滤光片型仪器不能满足日益增加的实验探测类型的需要,有时还需要研究物质的吸收、激发和发射光谱,因此光栅型仪器诞生较晚。

MD首先引入了光栅,通常称为单光栅。由于光纯度不高,在光栅后加一组带阻滤波器对杂光进行两次滤波,杂光率达到5×10-4,与纯滤光系统基本相同。后来,Tecan开发了双光栅技术,通过两个光栅滤波器将杂散光率降低到10-6。后来,Thermo、BioTek和PE的一些较新的设备都使用了类似的双光栅技术。这种机器又称四栅多功能酶标仪,因为每两个栅分别用于激发和发射。

随着光栅微孔板分析仪的创新,用户不再局限于波长的选择,而且在杂光率和带宽控制方面的性能也超过了滤波器系统。例如,2008年末,Tecan推出了第三代四光栅系统的M1000酶板仪,将异光率降至2×10-7的新低,并实现了2.5 ~ 20nm的连续可调带宽。这些都是目前的过滤型酶标仪不可能或难以实现的。

2. 杂光率和波长的精度

光栅式过滤系统已成为目前通用多功能酶标仪的主流。在众多厂家的共同努力下,光栅技术被推向了一个新的历史高度。在光栅的众多技术参数中,杂光率和波长选择的准确性无疑是最关键的。

杂光比是指光源通过光栅后获得的光中“不需要的”波长光与标称波长光的比例,表示滤光片光的纯度。由于光干涉和衍射的复杂性,无论是使用滤光片还是光栅都不可避免地会产生杂散光。各种滤波技术的本质是尽可能多地去除杂散光。一般来说,滤光片型的杂光率在10-4 ~ 10-5之间,光栅型可以在10-6 ~ 10-7之间。由于这种杂散光是非特异性的,直接进入最终的探测器,所以尽可能多的杂散光会引入随机误差。在荧光检测过程中,由于探测器的放大效应,杂光率的干涉会呈指数级放大。因此,杂散率是滤波器系统的主要性能指标。

光栅的另一个重要指标是波长选择的准确性。因为很多检测都依赖于特定波长下材料的特征轮廓。就像DNA/RNA的OD260浓度测量一样,如果实际检测波长与260nm相差数nm, OD值与最终浓度之间的数学关系就会发生变化。因此,对于一组性能良好的光栅系统,波长选择精度应在±0.5 nm ~ 1nm之间。过大的波长偏差有时会影响最终结果的准确性。

这两个可以说是光栅甚至滤波器滤波系统中最关键的技术参数,直接影响数据的准确性

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