酶标仪的功能及正确使用方法

　　作为微孔板比色计的酶标仪，其基本功能不外乎一个比色测定，所不同的是在测定波长范围、吸光度范围、光学系统、检测速度、震板功能、温度控制、定性和定量测定软件功能等方面的差异，当然全自动酶免疫分析系统还具有自动洗板、温育、加样等功能。在临床实验室实际工作中，实验人员在使用酶标仪进行测定操作时，有时难免会对酶标仪的一些性能指

标准混乱，甚至对酶标仪的应用产生误解。如酶标仪的阳性率较肉眼测定明显提高。

1、 酶标仪的波长在400-750nm或800nm之间，可以满足ELISA的要求。目前国内最常用的ELISA试剂盒是辣根过氧化物酶（HRP），底物通常是四甲基联苯胺（TMB）和邻苯二胺（OPD）。在过氧化氢存在下，酶被HRP氧化成2,2,2，二甲基偶氮苯（DAB）和苯醌。当pH值为5.0左右时，DAB在450nm波长处有最大吸收。当pH值降至l0时，最大吸收波长移到492nm，摩尔消光系数变大，颜色加深，因此通常用硫酸或盐酸等强酸终止反应。TMB的氧化产物在450nm波长处具有最大的消光系数。如果HRP小，h:o:TMB过高，就会形成蓝色的阳离子根。降低pH值可使蓝色阳离子根转化为黄色苯醌，以硫酸为终止剂可使产物稳定90min。因此，450nm和492nm是ELISA中最常用的两种方法。所有酶标仪均配有放置过滤器的自动转换部件，可同时安装6-8个过滤器。所有滤光片应包括上述两个波长。一些酶标准仪器用490nm滤光片代替492nm滤光片，影响不大。除这两种基本滤光片外，考虑到双波长比色法的需要，还应设有620nm或630nm或650nm和405nm滤光片，其他滤光片可根据自身需要选择。有时，一些实验室需要使用酶标仪进行微量生化测定，因此酶标仪厂家对酶标仪的紫外检测功能进行了扩展，需要340nm波长的滤光片。此时酶标仪的波长范围为340-750nm或800nm。

酶标仪具有单波长和双波长检测功能。有时，用户不知道在什么情况下使用单波长或双波长检测。所谓“单波长”，是用显色装置吸收最大的波长，即450nm或492nm进行比色测定；用“双波长”与显色装置最大吸收波长450nm或492nm进行比色测定，用对特定显色不敏感的波长630nm进行测定。酶标打印的最终吸光度是它们之间的差值。在630nm处获得的吸光度是非特异性的，它是由指纹、灰尘、污垢等的吸收引起的。因此，在ELISA比色法中，最好使用双波长，不需要空白孔。

2、 测定的吸光度范围一般为，酶标仪的吸光度为。酶联免疫吸附试验的测定要求在1.5～1之间，早期酶标仪测定的吸光度一般在1.5～1之间。在12.5之间，但现在基本上已经扩大到3.5以上，并能保持良好的精度和线性。例如，labsystems的dragon wellscan MK-2的吸光度为0-3.5，MultiScan ascent的吸光度为0-4.0，线性误差不大于0-4.0± 2.0%，在吸光度0.3-3.0范围内，精密度的变异系数小于± 0.2%; 在3.0～4.0abs范围内，精密度的变异系数小于0.2%。因此，酶标仪的吸光度范围无需刻意追求，主要取决于吸光度在一定范围内的线性和精密度。

3、 光学系统酶标仪的光学系统采用垂直光路多通道（一般为8或12通道，也可单通道）检测，一般为硅光管或光纤。除了测量通道外，一些酶标准仪器还具有一个参考通道，每次测量都可以进行自校准。酶标仪的吸光度范围、线性、精密度和准确度可以反映酶标仪的光学系统功能。如果光学系统良好，上述指标应该更好。测量的准确性直接关系到测量通道的均匀性。单通道可以避免不同通道造成的差异。

4、 酶标检测速度是指完成比色测定所需的时间